先进荧光显微成像技术

全内反射荧光显微镜

1. 光的折射：
   1. 斯涅尔定律：
   2. 全内反射临界入射角：满足条件是n1>n2
   3. 全内反射：
   4. 什么是倏逝光场？——消逝波是指当光波在两种介质产生全反射时发生的光学现象。消逝波又叫隐失波或者倏逝波，其幅值随与分界面相垂直的深度的增大而呈指数形式衰减。
   5. 光路设计与数字孔径：
   6. 技术优点：提高了纵向分辨率：
   7. 应用例子：(1) GLUT4葡萄糖转运体在脂肪细胞中的囊泡运输中涉及的胞吐现象(存在膜融合过程)——GLUT4 vesicles和Clathrin-coated pits的共定位对细胞骨架调控的研究——胰岛素对细胞微观生长的促进作用

多光子荧光显微镜

1. 双光子发展历程：
2. 双光子原理： ^819bc2
   1. 双光子吸收：
   2. 单光子和双光子的区别：注：因此双光子是一种点扫描成像技术，无需共聚焦针孔注：红外光的散射效率低，对活体组织穿透能力强
   3. 应用举例：(1)大脑中细胞和血管等的成像内源性荧光分子应用于线粒体能量代谢：
   4. 双光子荧光激发的物理特性：
3. 三光子荧光激发：注：二次谐波信号和内源性荧光指的是未染色的组织成像
4. 多光子与共聚焦对比：

反卷积显微镜

1. 点扩散函数：
2. 概述与傅里叶空间的实现：对模糊图像反卷积可得到清晰图像注：频率过滤器是截止频率
3. 技术优点：注：但图像采集【宽场照明】是和图像处理分开【使用高性能计算机和特殊软件进行成像后图像反卷积，即快速、便宜】的，可能会引入不存在的误差。
4. 反卷积算法的应用：(1)PIP2的成像：注：这里的四维是指随时间的三维变化成像
5. 反卷积算法实现的超分辨率成像：注：计算机模拟成像如下注：模拟TIRF图像
6. 反卷积与单分子荧光和共聚焦对比：

单分子定位超分辨率荧光显微镜