低温电镜样品制备和低剂量成像+聚焦离子束冷冻样品制备技术

低温电镜

1. 低温电镜样品制备：

   1. Cryo Fixation：非晶体结构(无定形)的冰不会破坏样品结构，后续冰的升华在-90℃左右，后续进行成像注：冰冻需要载网，载网需要挥发放电【去除其表面残余水分和其他挥发性物质，进而降低电子束与气体分子的相互作用，减轻散射效应】、表面清洗【洗去污染物，污染物可能导致电子束的散射】，冰冻用的是乙烷(液态区间较长，利于样品冷冻时保持10^-5的冷却速率，速率过慢会导致冰变质，温度过高非晶体的冰会晶化)

   2. 支持膜：样品分散性需要好，这样各个方向都有，有利于三维重构

2. 低剂量成像：尽可能把有效电子(无效电子指的是用于聚焦，调视野的电子——倍数越低，无效电子的剂量越小)用到成像上注：傅里叶变换评估成像质量，后进行校准

聚焦离子束冷冻样品

1. 流程：注：绿色箭头为切割方向，离子束和膜在15°左右，离子束和电子束在52°左右
2. 组织样品：
3. 荧光定位【信号强弱和形状的变化】可以对样品进行准确切割：