- 如何进行单分子定位？——带来亚像素级的概率最高的定位，定位精度可以超过衍射极限
注：单个荧光分子的概率分布，荧光光强越高则分布的概率越高！
注：受像素影响，单个荧光分子累积起来则呈现模糊状态(中间强，周围弱)，分子可能位于右下角的位置(右下角相对左上角亮一些)
- 定位的精度：由光子数决定(光电探测器有噪声，100个光子不会带来100个光强，有波动，可能会产生100±的光子)，光子数越多，信噪比越高(之间的亮暗关系更明确，更利于定位)，有更高的定位精度。例如10000个光子——9900-10100，100显得弱，精度更高。
- 如何导致单分子的随机事件？：PA-GFP：荧光分子吸收激发光子之后，存在构象变化；But存在吸收截面，存在一定的吸收概率(不一定给光照就发生构象变化)，激活光足够弱时(光强弱，同一时间，只有少数分子吸收405nm的光子，从而转化成亮态——随机性；之后一直开着激发光，直到它发生漂白，则再次激活其他荧光分子)
注：后续的开发是导致很多电子困在激发态，导致三线态(暗态不发荧光)
- 3D-STORM：焦平面是标准的PSF形状——柱面镜：随着深度不同，沿着Y方向不同方向的光线汇聚位置不一样，存在离焦(PSF形状由⚪变成椭圆)，对椭圆的X、Y方向进行高斯拟合(通过椭圆率来定位深度，相对于焦平面偏离多少)
- Bi-plane:同一个分子再两个焦平面的离焦程度来判断深度
- 分辨率高——需要足够高的标记密度，并不是定位精度高分辨率高