Imaging the Biological Processes

1. 我们可以通过荧光成像获得什么？——成像前我们需要知道什么？——

2. TIRF+2D+3D可拍的细胞深度：TIRF 100nm，2D 600nm，3D 全细胞记录

3. 不同成像方法的优缺点：

   1. Wide field / Epi illumination：
   2. Total internal reflection fluorescence (TIRF)：
   3. PALM:
   4. Confocal：(1)Advantage: 克服TIRF无法观测内部缺陷，可以3D成像 (2)Disadvantage:点扫描方式成像较慢（可用转盘解决）
   5. SIM:注：可以通过计算方法进行3D成像成像速度快，可以进行活体成像
   6. STED:
   7. 光片显微镜light sheet microscopy如下:注：光片light sheet：物镜与入射光线垂直，使得样品只有一薄层被照明。(1)问题：高倍率物镜工作距离很小会与入射光筒碰撞，限制物镜NA。(2)擅长：细胞级别（500nm以上）长时程动态成像.可以结合SIM进行超分辨成像
   8. Minflux：在已知PSF物理模型时，通过在三个位置测量光强，可以推理出荧光分子的二维位置（类似于GPS）

4. mRNA成像:

   1. WHY?
   2. 方法：
      1. FISH(原位杂交)：
      2. M2-like 系统：
      3. RNA aptamer and its binding organic dyes：
      4. 量子研究工具：