共聚焦

激光扫描共聚焦显微镜-LSCM

1. 原理：以激光为光源，采用照明针孔与检测针孔共轭聚焦技术，对样品实现断层(逐点、逐行、逐面快速扫描——“CT式”逐层扫描，获得相应某一层面（二维）及连续多个层面（三维）的荧光图像)扫描，获得高分辨率光学切片的显微镜技术。在此基础上，进一步完成三维重建、荧光信号定性、定位和定量测定等功能。
2. 宽场照明和点照明的区别：
3. 共聚焦的成像方式：单点扫描模式，需要依靠两个独立的扫描镜，产生X—Y平面的扫描，后对光学切片与轴向的图像进行采集。最后通过三维图像重构进行图像处理。
4. 共聚焦和传统显微镜的区别：
   1. 分辨率：
   2. 共聚焦优势：(1)获取连续的光学切片；(2)可抑制图像的模糊，获得清晰的图像；(3)对比度高；(4)提高了横向、轴向分辨率；(5)多通道同时扫描，可实现多分子同时研究；(6)ZOOM 成像：在不变换镜头的情况下，对样品局部进行精细逐点扫描成像，获得高分辨放大的图像。(7)多维度扫描：通过调节针孔的大小，控制样品扫描层的厚度，可组成获得高分辨率的光学断层图像。
5. 全数字共聚焦显微镜：
6. 应用：

激光扫描共聚焦显微镜的发展

1. 双光子激光扫描显微镜：可用于长时间连续、大深度观察
2. FLIM荧光寿命成像显微镜：FLIM将寿命(荧光寿命是荧光染料的特征参数，可能会受到微环境或构象的影响而发生改变。寿命信息可用于研究分子环境的构成，如离子浓度、pH、亲脂性或与其他分子的结合等)测量和成像相结合，图像显示每一像素点的寿命。FLIM显示荧光分子的空间分布及其纳米环境，由此获取了全新维度的信息。
   • 数据获取与分析：
3. 转盘共聚焦显微镜(SDCM)：相比LSCM(逐点、逐行扫描成像，速度慢)，SDCM是并行多点同时激发，同时检测的并行confocal microscopy，可在细胞层次对ms量级的分子间相互动态过程进行定位和跟踪研究。
4. 共聚焦实时成像：Live-imaging
5. 显微活体成像技术：实时无创的连续监测活体动物上的GFP等荧光信号，而且可以观察到一个GFP等荧光标记的细胞在活体动物上的迁移情况。
6. 时间分辨成像技术：