1.STED::受激辐射,电子受入射光的诱导,擦除位于激发态的电子,电子跃迁到基态(只能去特定的0态),产生和STED波长一致的光子STED Emission:一个STED光产生两束STED光(方向相同、波长一样)——激光产生的原理:STED光在尾部,使得周围一圈都辐射STED光,滤掉STED和激发光,便只有甜甜圈中央(不受干扰的荧光信号——光线相消)的光子,荧光的范围缩小,荧光分辨率提高 1. 为什么提高?——只发生在样本内,通过物镜收集,探测器产生的光斑还是衍射受限的光斑(大光斑 500-600)——用30nm的物镜对图像扫描(多荧光信号的加和,但像素尺度只来自60nm的范围内),可以分开60nm则是60nm的分辨率。 2. 分辨率::Sat——STED光强增加到某一数值时,荧光信号下降到原来的1/e;I/Isat越高,分辨率越高;饱和受激辐射跃迁的概率(增大光强,跃迁概率增大,即使是峰值50%的位置也能100%受激跃迁),但增大光强可能会导致光漂白的效应(进三线态是光漂白的一个条件) 3. Z方向上: 2. RESOLFT: